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物體識別實(shí)驗(yàn)(ORT)是一種常用的行為測定法，用于研究小鼠學(xué)習(xí)和記憶的各個(gè)方面。ORT相當(dāng)簡單，可以在3天內(nèi)完成:適應(yīng)日、訓(xùn)練日和測試日。在訓(xùn)練過程中，允許小鼠探索兩個(gè)相同的物體。在測試日，其中一個(gè)物體被替換為一個(gè)新物體。因?yàn)槔鲜筇焐鷮π缕媸挛镉衅?，如果老鼠識別出熟悉的物體，它會把大部分時(shí)間花在新奇的物體上。由于這種與生俱來的偏好，不需要積極或消極的強(qiáng)化或長時(shí)間的訓(xùn)練計(jì)劃。
此外，ORT也可以針對多種應(yīng)用進(jìn)行修改?？梢钥s短保留間隔時(shí)間來檢查短期記憶，也可以延長保留間隔時(shí)間來探查長期記憶?？梢栽谟?xùn)練前、訓(xùn)練后或回憶前的不同時(shí)間使用藥物干預(yù)來研究學(xué)習(xí)的不同階段(即獲得、早期或晚期鞏固或回憶)?？傮w而言，ORT是一種相對低壓力、有效的小鼠記憶測試，適用于檢測藥理學(xué)、生物學(xué)或遺傳學(xué)操作后的神經(jīng)心理變化。
實(shí)驗(yàn)介紹
物體識別試驗(yàn)(ORT)又稱新型物體識別試驗(yàn)(NOR)，是檢測小鼠學(xué)習(xí)記憶不同階段的一種相對快速有效的手段。最初由Ennaceur和Delacour在1988年描述，主要用于大鼠。然而，從那時(shí)起，它已成功地適用于小鼠。該測試只依賴于三個(gè)階段:一個(gè)習(xí)慣化階段，一個(gè)培訓(xùn)階段和一個(gè)測試階段。訓(xùn)練僅僅涉及對兩個(gè)相同物體的視覺探索，而測試階段則涉及用一個(gè)新的物體替換先前探索過的物體。因?yàn)閲X動(dòng)物有一種天生的對新奇事物的偏好，一只記得熟悉的物體的嚙齒動(dòng)物會花更多的時(shí)間探索新奇的物體。
與其他嚙齒動(dòng)物記憶測試相比，ORT的主要優(yōu)勢在于它依靠嚙齒動(dòng)物的自然傾向來探索新奇事物。因此，不需要大量的培訓(xùn)課程或任何積極或消極的強(qiáng)化來激勵(lì)行為。這意味著相對于其他測試，ORT的壓力要小得多，并且比其他常用的記憶測試(如Morris水迷宮或Barnes迷宮)需要的運(yùn)行時(shí)間短得多，這兩種測試都需要一周或更長時(shí)間。因此，口服體液補(bǔ)充療法的條件與研究人類認(rèn)知所用的條件更相似，這增加了該試驗(yàn)相對于許多其他嚙齒動(dòng)物記憶試驗(yàn)的生態(tài)有效性。
同樣，由于ORT是一項(xiàng)簡單的視覺回憶任務(wù)，因此它已成功地適用于包括人類和非人靈長類在內(nèi)的許多物種，以評估陳述性記憶的不同種間方面。最后，可以很容易地修改ORT，以檢查學(xué)習(xí)和記憶的不同階段(即獲得、鞏固或回憶)，評估不同類型的記憶(如空間記憶)，或評估不同的記憶保持間隔(即短期記憶與長期記憶)。
實(shí)驗(yàn)揭秘
如何選擇合適的物體？
選擇不同的物體，以便于動(dòng)物識別，但具有相似的復(fù)雜程度(紋理、形狀、顏色模式和亮度等)。有效地減少任何可能影響結(jié)果的潛在誘發(fā)的物體偏好。
使用與老鼠大小接近或稍大一點(diǎn)的物體來鼓勵(lì)探索(圖1)。為了減少誘發(fā)的偏好，確保小鼠能夠在兩個(gè)物體上或兩個(gè)物體都不能攀登，盡管攀登物體的能力可能會增加探索的興趣(僅僅坐在物體上的時(shí)間不計(jì)入探索時(shí)間)。
每個(gè)物體至少有2個(gè)相同的。為了在測試過程中最大限度地減少潛在的氣味線索，事實(shí)上每個(gè)物體建議要有3個(gè)，一個(gè)用于訓(xùn)練，一個(gè)用于測試，一個(gè)用于更換除味。
使用由不易碎材料制成的物體，因?yàn)樵趯?shí)驗(yàn)過程中由于損壞而丟失物體可能會干擾測試的連續(xù)性，并可能對動(dòng)物造成傷害或傷害。
在使用前和使用之間*清潔物體。
實(shí)驗(yàn)光線
為了盡量減少明亮照明的壓力，請使用漫反射、低照明，迷宮中心的照明度約為 20 勒克斯。使用類似于常規(guī)住房條件的溫度和濕度。如果將老鼠從一個(gè)房間搬到另一個(gè)房間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，請?jiān)诿刻焓褂们白尷鲜筮m應(yīng)新房間至少 1 小時(shí)。
實(shí)驗(yàn)預(yù)處理
在訓(xùn)練前將老鼠處理好。由于該試驗(yàn)依賴于嚙齒動(dòng)物探索新奇事物的自然傾向，因此可減少處理過程中可能會干擾其探索競技場以及隨后探索物體的區(qū)域的任何壓力或焦慮。理想情況下，每天處理小鼠1 - 2次，至少1分鐘，試驗(yàn)前1-2周。
實(shí)驗(yàn)步驟
在訓(xùn)練日，在對角線上放置 2 個(gè)相同的物體（即一個(gè)在 NW 角，一個(gè)在 SE 角）。如果物體太輕并且可以被老鼠移動(dòng)，需要將它們固定在地板上。
在測試日，使用每個(gè)物體的第三個(gè)副本，將一個(gè)熟悉的物體和一個(gè)新奇的物體放置在與訓(xùn)練日相同的對角線上(圖2)。
Tip：對于實(shí)驗(yàn)測試箱，使用由白色或黑色無孔塑料制成的方形室(約40 cm x 40 cm x 40 cm)，與小鼠的顏色形成對比。或者，使用圓形開放場平衡每組物體的使用，這樣每一個(gè)物體都可以作為一個(gè)熟悉的物體和一個(gè)新奇的物體使用。此外，平衡新物體的位置到競技場的4個(gè)角落。確保記錄哪只對角線用于哪只動(dòng)物，以便訓(xùn)練日使用的對角線與測試日每只小鼠使用的對角線相同。
將相機(jī)直接放在設(shè)備的上方，以獲得最佳的探索視野?？墒褂镁哂斜屈c(diǎn)檢測功能的VisuTrack軟件進(jìn)行準(zhǔn)確分析。如果使用軟件，請?jiān)陂_始之前捕獲已放置對象的背景圖像。在軟件中，將探索區(qū)域設(shè)置為對象周圍大約 2-3 cm。
在實(shí)驗(yàn)過程中，請確保實(shí)驗(yàn)者距離實(shí)驗(yàn)箱1米以上，并且老鼠不可見。注意：任何時(shí)候老鼠坐在物體上而沒有主動(dòng)的觸須掃描或嗅探都不算作探索時(shí)間。
數(shù)據(jù)分析
在訓(xùn)練(T1)和測試(T2)期間，計(jì)算每個(gè)會話中兩個(gè)對象的總探索時(shí)間(e1和e2)。大多數(shù)小鼠應(yīng)在5分鐘前達(dá)到兩個(gè)物體20秒的最小探測總數(shù)。
對于探索性低且不符合此標(biāo)準(zhǔn)的小鼠品系，將T1和T2時(shí)間延長至10 min，延長5 min，如試點(diǎn)測試期間所觀察到的。
對行為評分5分鐘或超過5分鐘，直至達(dá)到20秒的標(biāo)準(zhǔn)。
如果小鼠在10分鐘內(nèi)對T1或T2兩個(gè)物體的探索未達(dá)到20秒的最小值，則排除在分析之外，因?yàn)闊o法確認(rèn)它們是否花費(fèi)了足夠的探索時(shí)間來學(xué)習(xí)/辨別。
